多沉 PCR 技术简介

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多沉 PCR 是一种宽泛利用的分子生物学技术，可在单个 PCR 尝试中同时扩增多个指标序列。在多沉反映系统中，通过使用多对引物，可同时扩增一个以上的指标序列。作为 PCR 技术的扩大利用，多沉 PCR 能在不降落尝试效用的前提下，显著节俭尝试室的功夫和资源。

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多沉 PCR 的类型

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多沉反映大体分为两类：

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1. 单模板多沉 PCR
   使用单一模板（如基因组 DNA），共同多对正向和反向引物，扩增该模板上的多个特定区域。

2. 多模板多沉 PCR
   在统一反映管中使用多种模板和多组引物。由于存在多种引物，可能产生引物间的交叉杂交以及与其他模板的谬误配对。

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多沉 PCR 的引物设计参数

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设计特异性引物组是成功进行多沉反映的关键。以下参数对实现高产量的特异性扩增极其沉要：

1. 引物长度
   多沉 PCR 必要设计大量引物，因而引物长杜爪适当。通常使用 18–22 个碱基的短引物。

2. 熔解温度（Tm）
   应使用 Tm 值相近的引物，优选在 55°C–60°C 之间。对于高 GC 含量的序列，建议使用较高 Tm（75°C–80°C）的引物。统一引物池中各引物的 Tm 差距在 3°C–5°C 内是可接受的。

3. 特异性
   设计多沉检测时，引物对指标序列的特异性很沉要，由于在统一反映管中存在多个指标序列时会形成竞争。

4. 预防引物二聚体
   应查抄设计的引物与反映系统中所有其他引物是否可能形成二聚体。二聚体味导致非特异性扩增。

其他参数与尺度 PCR 引物设计指南一样。

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多沉 PCR 的优势

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1. 内置对照
   单一 PCR 可能因反映失败导致假阴性或因传染导致假阳性。多沉检验中，每个扩增子可作为其他扩增片段的内部对照，有助于发现假阴性。

2. 提高效能
   与使用多管单一 PCR 相比，多沉 PCR 的试剂成本和造备功夫更少。对于节约昂贵的聚合酶和有限的模板，多沉反映是梦想选择。

3. 反映模板质量
   与单沉 PCR 相比，多沉 PCR 能更有效地评估模板质量。

4. 反映模板数量
   多沉 PCR 的指数扩增和内标可用于评估样品中特定模板的量。正确进行定量时，需思考参考模板量、反映循环数以及每循环产品理论倍增所受的最幼抑造。

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多沉 PCR 的利用

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• 病原体鉴定

• 高通量 SNP 基因分型

• 突变分析

• 基因缺失分析

• 模板定量

• 连锁分析

• RNA 检测

• 法医学钻研

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PrimerPlex：多沉 PCR 引物设计工具

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PrimerPlex 是一款用于设计多沉 PCR 检验专用寡核苷酸的有效工具。该法式会查抄寡核苷酸之间的交叉反映性，并尽量减幼 Tm 差距，以提供较优的多沉引物组合。在此过程中，它可在数秒内分析数百万种可能的多沉组合，并给出备选规划列表。

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